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不同類型 酶標條 檢測原理 差異
以下是本生對不同類型酶標條的檢測原理及核心差異分析,結合免疫檢測技術特點進行分類說明:
一、按檢測模式分類
光吸收酶標條?
原理?:基于比色法,通過測量特定波長(如450nm)下底物顯色的吸光度值,計算目標物濃度。常用TMB(3,3'-二甲基聯苯胺)作為顯色底物,在HRP(辣根過氧化物酶)催化下產生藍色產物,酸化后轉為黃色?。
特點?:成本低、操作簡單,但動態范圍窄,靈敏度較低,適合常規ELISA檢測?。
熒光酶標條?
原理?:利用熒光染料標記抗體/抗原,激發光照射后檢測發射光強度。如FITC標記的抗體在490nm激發后發射520nm熒光?。
特點?:靈敏度高(可達皮摩爾級),背景干擾小,支持多重檢測(如雙通道同步分析),但易受環境光干擾?。
化學發光酶標條?
原理?:通過酶(如HRP或ALP)催化發光底物(如魯米諾)產生光子信號,直接檢測光強度。輝光型發光穩定,閃光型需快速檢測?。
特點?:靈敏度最高(可達飛摩爾級),無背景光干擾,但需專用高靈敏度檢測器?。
二、按免疫反應類型分類
直接法酶標條?
原理?:酶直接標記一抗,與抗原結合后顯色。僅需單抗體系統,步驟少但需標記每種一抗?。
適用場景?:已知高濃度抗原檢測(如病毒蛋白篩查)?。
間接法酶標條?
原理?:未標記一抗與抗原結合后,再用酶標二抗放大信號。通過二抗通用性降低成本?。
適用場景?:抗體檢測(如HIV抗體篩查),靈敏度高于直接法?。
夾心法酶標條?
原理?:雙抗體夾心抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標抗體"復合物。需抗原具備多表位?。
適用場景?:低豐度抗原(如細胞因子),特異性與靈敏度俱佳?。
競爭法酶標條?
原理?:樣本抗原與標記抗原競爭結合有限抗體,信號值與樣本抗原濃度成反比?。
適用場景?:小分子半抗原(如激素、藥物)定量?。
三、關鍵差異對比
類型? ?信號來源? ?靈敏度? ?適用場景? ?成本?
光吸收型 顯色吸光度 較低(納摩爾級) 常規ELISA、高濃度樣本 低
熒光型 熒光發射強度 高(皮摩爾級) 多重檢測、低豐度蛋白 中高
化學發光型 光子計數 (飛摩爾級) 超微量檢測(如腫瘤標志物) 高
直接法 單抗體系統顯色 中等 已知抗原快速篩查 高(需標記)
間接法/夾心法 雙抗體系統信號放大 高 抗體或復雜樣本檢測 中(通用二抗)
四、選型建議
根據檢測目標?:低豐度蛋白優先化學發光,多重指標選熒光?。
根據樣本類型?:小分子用競爭法,復雜基質用夾心法?。
根據設備配置?:光吸收型適配普通酶標儀,化學發光需專用檢測模塊?。
注:以上資料僅供參考,實驗前建議通過小樣測試驗證膜性能?。
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